Kodeks ini berasal dari abad keempat M dan awalnya berisi seluruh Alkitab dalam bahasa Yunani. Kodeks ini terbuat dari vellum (bahan yang berkualitas dari kulit binatang), dan teksnya ditulis dengan jenis huruf uncial. (Lihat MANUSKRIP; UNCIAL.) Di kodeks ini, teks dalam buku-buku puisi dibuat menjadi dua kolom per halaman, sedangkan teks buku-buku Alkitab lain dibuat menjadi tiga kolom per halaman.

Kodeks ini tidak lengkap karena ada beberapa bagiannya yang hilang. Awalnya, kodeks ini mungkin terdiri dari 820 lembar, tapi hanya 759 lembar yang masih ada sekarang. Jadi, kodeks ini sekarang dimulai dari Kejadian 46:28 dan tidak memuat sebagian buku Mazmur, Ibrani 9:14 sampai 13:25, dan seluruh 1 dan 2 Timotius, Titus, Filemon, dan Wahyu. Ada yang berpendapat bahwa kodeks ini dibuat di Mesir, tapi tidak ada informasi yang pasti tentang asal-usul kodeks ini. Kodeks ini diyakini sudah disimpan di Perpustakaan Vatikan sejak abad ke-15. Tapi, para pakar baru mengetahui keberadaan kodeks ini pada abad ke-19.

Karena usia dan kualitasnya, kodeks ini dianggap sebagai salah satu manuskrip Septuaginta Yunani dan Kitab-Kitab Yunani Kristen yang paling berharga. Karena itulah kodeks ini menjadi salah satu sumber utama yang digunakan dalam penerjemahan Alkitab modern. Para pakar menggunakan kodeks yang tepercaya ini, dan juga Kodeks Sinaitikus dan Kodeks Aleksandrinus, untuk mengenali teks yang ditambahkan dan kesalahan penyalinan di manuskrip-manuskrip yang lebih baru.​—Lihat ”Kodeks Vatikanus​—Bagian Akhir Injil Markus” di Galeri Media dan keterangan tambahan Yoh 7:53.